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基因編輯革命!西湖大學開發凝聚體遞送Cas9-RNP,實現原代細胞高效編輯

更新時間:2025-04-02

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小鼠原代免疫細胞的精準基因編輯可直接操控免疫關鍵分子,實現功能與信號通路的快速驗證,在保留細胞生理特性的同時避免了耗時的轉基因動物構建。然而,這一研究利器長期受困于技術瓶頸——傳統的慢病毒、電穿孔和脂質體轉染系統在遞送 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白(Cas9-RNP)復合物時效率低下,且嚴重損傷細胞活力。西湖凝聚體與西湖大學聯合開發的 ProteanFect CRISPRMax Ultra 小鼠免疫細胞轉染試劑盒,通過創新的生物分子凝聚體技術,遞送 sgRNA 與重組 Cas9 蛋白 RNP 進入小鼠免疫細胞并實現高效基因編輯,為免疫學研究提供了突破性解決方案。同時,整個過程簡單高效,且無需 sgRNA-Cas9 提前孵育,使原代免疫細胞轉染像 HEK293 細胞系一樣容易!


ProteanFect CRISPRMax Ultra 基因編輯機制

ProteanFect 遞送系統實現基因編輯的分子機制如下(圖1):

1、Cas9 蛋白、sgRNA與 ProteanFect 內源蛋白一起組裝成為 Cas9 RNP-凝聚體復合物;

2、Cas9 RNP 通過 Proteanfect 遞送進入細胞內;

3、Cas9 RNP 復合物被 Proteanfect 釋放并進入細胞核與靶 DNA 結合;

4、精準切割靶基因,實現高效基因編輯。

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圖1. ProteanFectCRISPRMax Cas9RNP遞送原理

這種遞送策略極大避免了電穿孔等物理方法對細胞膜的損傷,以及病毒載體可能引起的免疫原性問題,同時實現了比直接遞送 RNP 蛋白更高的編輯效率。


ProteanFect CRISPRMax Ultra遞送系統:效率與細胞活性的平衡:

無需預組裝,凝聚體作為高效生物反應器,制備過程中,一分鐘之內即可完成快速組裝;

無需入胞后翻譯成蛋白,快速進入后直接進行基因編輯;

不依賴于持續激活,能保持穩定的編輯效率;

高效實現小鼠原代T細胞、NK細胞、γδ T細胞、Treg細胞等免疫細胞的基因編輯。

實驗數據:小鼠原代T細胞中的超高效基因編輯ProteanFect CRISPR Ultra 小鼠免疫細胞轉染試劑盒對小鼠原代 T 細胞進行基因編輯:采用 TracsgRNA/Cas9 RNP 轉染的方案,結果如下圖1所示。基因組水平檢測(圖2左)顯示小鼠 T 細胞整體 Trac 敲除率達83.5%,蛋白水平檢測(圖2右)顯示 Trac 敲除效率達93.0%。

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圖2. 使用ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠免疫細胞轉染試劑盒對小鼠原代T細胞進行基因編輯


突破傳統:ProteanFect CRISPRMax Ultra與其他CRISPR方法對比

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表1. ProteanFect與傳統CRISPR方法對比


全·球首·創:基于生物分子凝聚體的分子遞送技術

ProteanFect 凝聚體技術:ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創新的生物分子凝聚體技術:ProteanFect蛋白分子能夠在體外與核酸、蛋白等自組裝成高度規律的球體結構,這種自組裝而成的ProteanFect-核酸/蛋白復合物能夠通過細胞的主動攝入高效進入細胞內,迅速釋放核酸分子,實現基因表達,同時天然降解其余蛋白。

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圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖(以遞送核酸為例)


ProteanFect CRISPR Ultra小鼠免疫細胞轉染試劑盒——一步到位的基因編輯解決方案

使用便捷:試劑盒中包含陽性對照,您只需準備sgRNA即可開展實驗

即開即用:所有組分已優化配比,無需繁瑣調試

高效可靠:標準化流程確保實驗結果穩定可重復

全·程無·憂:提供詳細操作指南和一對一技術支持

ProteanFect 助您輕松實現小鼠免疫細胞的精準基因編輯。如需了解更多技術細節或產品信息,可聯系華雅思創生物


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