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原代細(xì)胞培養(yǎng)基的凍存與復(fù)蘇技術(shù)工藝

更新時(shí)間:2021-07-22

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   原代細(xì)胞培養(yǎng)基用于人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的研究。是培養(yǎng)原代細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)原代細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬動(dòng)物細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境,維持體外細(xì)胞存活和增殖的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)基礎(chǔ),其主要功能是為細(xì)胞提供適宜的pH和滲透壓,以及細(xì)胞本身不能合成的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
  原代細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。
  原代細(xì)胞培養(yǎng)基凍存
  1、選用生長(zhǎng)情況好,數(shù)量較多的原代細(xì)胞,凍存前一天換液一次。
  2、貼壁細(xì)胞需用0.25%胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來,將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
  3、1000rpm離心5分鐘,棄上清液。
  4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液,計(jì)數(shù),調(diào)整至(1-10)×106/ml。
  5、將懸液分至凍存管中,每管1ml。
  6、密封凍存管,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。
  7、用記號(hào)筆標(biāo)明細(xì)胞種類,凍存日期。
  8、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(—80℃過夜)→液氮。
  原代細(xì)胞培養(yǎng)基復(fù)蘇
  1、取出細(xì)胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
  2、吸出細(xì)胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液。
  3、1000r/分鐘離心5分鐘,去除上清。
  4、用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃ CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
  鏡檢細(xì)胞貼壁能力。次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
 
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